超声协同酶法提取紫花苜蓿多酚及其抗氧化性质

引用本文

施伟梅, 吴龙火, 杨翔, 杨莎. 超声协同酶法提取紫花苜蓿多酚及其抗氧化性质. 草业科学, 2016,33(3):519-526
Shi Wei-mei, Wu Long-huo, Yang Xiang, Yang Sha. Ultrasonic-enzyme synergistic extraction and antioxidant activity analysis of alfalfa polyphenols. Pratacultural Science,2016,33(3): 519-526 复制到剪切板

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《草业科学》编辑部

超声协同酶法提取紫花苜蓿多酚及其抗氧化性质

施伟梅, 吴龙火, 杨翔, 杨莎

赣南医学院药学院,江西赣州 341000

施伟梅(1985-),女,福建云霄人,讲师,硕士,主要从事天然产物活性成分研究.E-mail: maisi540@163.com

收稿日期: 2015-10-09

基金: 国家自然科学基金(81360277); 赣南医学院科研课题(YB201429)

摘要

采用超声协同酶法提取紫花苜蓿多酚.以多酚提取量为指标,考察了液料比,加酶量,酶解时间,超声时间,超声温度及pH 6个因素对多酚提取效果的影响,并通过响应面法优化该提取工艺.同时探讨其抗氧化活性.结果表明,超声协同酶法提取紫花苜蓿多酚的最佳工艺条件为酶量4.9%,超声时间74 min,超声温度49 ℃,多酚提取量可达3.642 mg·g^-1.此外,紫花苜蓿多酚具有较好的抗氧化活性,其清除DPPH和·OH自由基的半数抑制浓度IC₅₀分别为10.78和19.28 μg·mL^-1.

关键词: 纤维素酶; 超声波; 多酚; 紫花苜蓿

中图分类号:S816 文献标志码:A 文章编号:1001-0629(2016)3-0519-08 doi: 10.11829/j.issn.1001-0629.2015-0419

Ultrasonic-enzyme synergistic extraction and antioxidant activity analysis of alfalfa polyphenols

Shi Wei-mei, Wu Long-huo, Yang Xiang, Yang Sha

College of Pharmacy, Gannan Medical University, Ganzhou 341000, China

Corresponding author: Shi Wei-mei E-mail:maisi540@163.com

Abstract

The polyphenols from alfalfa were extracted by ultrasonic-enzyme synergistic method. The effects of liquid-solid ratio, enzyme addition volume, enzyme incubation time, ultrasonic time, ultrasonic temperature and pH on phenol yield of alfalfa were investigated, and the extraction technology was optimized by response surface experiment. The antioxidant activities of alfalfa phenols were also studied. The results showed that the optimum technology factors for extracting alfalfa phenols were as follows: enzyme addition was 4.9%, ultrasonic time was 74 min and ultrasonic temperature was 49 ℃. Under this condition, the highest extraction quantity of total phenols could reach 3.642 mg·g^-1. In addition, the phenols showed strong activities for DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) and hydroxyl radical scavenging, and the half scavenging concentration (IC₅₀) of DPPH and ·OH radicals were 10.78 μg·mL^-1 and 19.28 μg·mL^-1, respectively.

Keyword: cellulase; ultrasonic; polyphenols; alfalfa

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紫花苜蓿(Medicage stativa)为多年生豆科苜蓿属植物, 在我国长江西北, 华北, 东北, 西北地区均有种植, 是我国的主产牧草之一, 因其强适应性, 高产草量, 营养均衡且品质极佳等优点而被誉为是"牧草之王"^{[1, 2, 3]}.研究表明, 紫花苜蓿中含有蛋白质, 黄酮, 多糖, 挥发油, 香豆素以及多酚等多种活性成分, 具有很高的药用价值^{[4, 5, 6, 7, 8, 9]}.多酚类化合物是形成植物固体部分的重要组成物质, 具有抗氧化, 抗肿瘤, 预防高血压, 抗血栓, 抗菌, 抗炎等生物活性及具有皮肤保健, 美容等功能^{[10, 11, 12, 13, 14]}, 因而受到国内外学者的广泛关注.但目前为止有关紫花苜蓿中多酚类物质的研究报道仍然较少.刘杰等^[15]采用Folin-Ciocaileu 比色法对苜蓿种子中总多酚的含量进行了检测, 其含量为3.03~4.88 mg· g^-1; 燕雪花等^[16]采用乙醇回流法对新疆不同地区紫花苜蓿总多酚进行了提取, 结果表明, 不同产地紫花苜蓿总多酚含量存在显著差异.

超声协同酶提取方法能最大限度破坏细胞壁, 增大其通透作用, 有利于细胞内含物渗出, 进而大大增加植物有效成分的提取量, 且能保持其它物质的原生结构, 成为目前植物成分提取的热门方法之一^{[17, 18, 19]}.笔者采用超声协同酶法对河北省怀来县紫花苜蓿多酚的提取工艺进行了探讨, 建立紫花苜蓿中多酚提取的新方法, 并研究了其提取物清除DPPH自由基和· OH自由基的能力, 旨在为紫花苜蓿的开发提供理论依据.

1 材料与方法

1.1 主要试验材料

紫花苜蓿, 2015年2月采集于河北省怀来县, 用去离子水洗净晾干后, 于50 ℃ 烘箱中烘干24 h, 粉碎, 过0.25 mm筛, 于干燥器中保存备用.没食子酸对照品(HPLC≥ 98%), 中国药品生物制品检定所; 纤维素酶为江苏锐阳生物科技有限公司生产, 5万U· g^-1; 维生素C(Vc)标准品(HPLC≥ 99%), 上海金穗生物科技有限公司; K₃Fe(CN)₆, FeCl₃, 磷酸氢二钠, 邻二氮菲, 柠檬酸及乙醇等试剂均为分析纯.

1.2 试验方法

1.2.1 没食子酸标准曲线的建立精密称取没食子酸对照品19.70 mg, 加50%乙醇溶解定容至50 mL, 配成浓度为394.0 μ g· mL^-1溶液, 再移取4 mL该溶液用50%乙醇稀释成100 mL, 配成浓度为15.76 μ g· mL^-1的没食子酸标准溶液备用.精确量取没食子酸标液0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2和1.4 mL, 分别置于10 mL容量瓶中, 依次加入浓度均为0.100 mol· L^-1的HCl溶液, FeCl₃溶液和K₃Fe(CN)₆溶液各0.5 mL, 摇匀, 用50%乙醇定容后于室温避光放置20 min, 以不加没食子酸标液的相应溶液作空白, 在700 nm处测定吸光度, 重复3次, 取平均值绘制没食子酸质量浓度与吸光度的标准曲线.所得回归方程为:y=0.198 1x+0.001 33, R²=0.999 2, 式中y为标液的吸光度, x为没食子酸的质量浓度(μ g· mL^-1).

1.2.2 紫花苜蓿多酚含量的提取工艺及测定精确称取适量的紫花苜蓿粉末于10 mL比色管中, 加入一定量纤维素酶, 用50%乙醇溶液定容至刻度, 在适当的酶解温度, 时间和pH下, 按照设定的条件进行酶法提取后, 升温到90 ℃ 灭酶10 min, 再转入超声仪中, 用按照设定的程序进行超声波辅助法提取紫花苜蓿中的多酚, 抽滤, 滤液定容待测.

取2.0 mL上述提取液, 按一定比例稀释, 用紫外分光光度计按照1.2.1法测定其吸光度, 根据回归方程标准曲线, 按下式计算紫花苜蓿多酚的提取率.

多酚提取量= $\begin{matrix} \frac{ρ \cdot n \cdot V}{W} \end{matrix}$ .

式中, ρ 为紫花苜蓿提取液多酚的质量浓度(mg· mL^-1); n为提取液稀释因子; V为提取液体积(mL); W为紫花苜蓿粉末的质量(g).

1.3 试验设计

1.3.1 单因素试验分别对液料比, 加酶量, 酶解时间, 超声时间, 超声温度及pH共6个因素进行单因素试验, 探究各因素对紫花苜蓿多酚提取效果的影响.

1.3.2 响应面试验设计采用响应面法中Box-Behnken Design(BBD)中心组对紫花苜蓿多酚的超声协同酶法提取工艺进行优化.在对单因素结果进行分析后, 应用Design-Expert V 8.0.6软件进行试验设计, 以加酶量(X₁), 超声时间(X₂)及超声温度(X₃)为独立变量, 以紫花苜蓿多酚提取量为响应值, 以二次多项式逐步回归分析优化提取条件, 响应面因素与水平见表1.

表1 响应面因素与水平表 Table 1 Factors and levels of response surface methodology

1.3.3 验证与比较试验过软件分析获得最佳提取工艺条件后, 按照优化条件进行提取测定, 比较试验结果和方程计算值的差异.

1.4 紫花苜蓿多酚的抗氧化性试验

依据上述最佳工艺条件提取紫花苜蓿多酚, 并参照陈玮琦等^[20]纯化苹果(Malus sieversii)枝条多酚的方法, 采用AB-8大孔吸附树脂对提取液进一步纯化, 再将纯化液稀释成不同质量浓度梯度的溶液备用.以清除DPPH和· OH自由基的能力为指标, Vc作为参照, 对比紫花苜蓿多酚及Vc在同一质量浓度下抗氧化活性的大小.

1.4.1 清除DPPH自由基各取2.0 mL不同质量浓度的紫花苜蓿多酚纯化液于10 mL具塞试管中, 分别加入2.0 mL 0.08 mg· mL^-1的DPPH 溶液, 摇匀, 待反应30 min后, 离心, 于517 nm处测定其上清液的吸光度, 标记为A_x1; 另各取2.0 mL 不同质量浓度的紫花苜蓿多酚纯化液于10 mL具塞试管中, 分别加入2.0 mL无水乙醇, 在波长517 nm 处测其吸光度, 标记为 A_x2; 反应30 min后的2.0 mL 0.08 mg· mL^-1 的DPPH溶液和2.0 mL 无水乙醇混合液做为参比, 其吸光度标记为A₀.平行测定3次, 取平均值, 依照下式计算DPPH的清除率.V_C 清除DPPH的对照试验方法同上.

DPPH 自由基清除率=(1- $\begin{matrix} \frac{A_{x_{1}} - A_{x_{2}}}{A_{0}} \end{matrix}$ )× 100%.

1.4.2 清除· OH自由基取8支20 mL容量瓶, 分别加入4.0 mL pH为7.4的NaH₂PO₄-Na₂HPO₄缓冲液, 1.5 mL 7.5 mmol· L^-1的邻二氮菲溶液, 1.0 mL 7.5 mmol· L^-1 FeSO₄和 1.0 mL 0.1% H₂O₂, 再加入2.0 mL一定质量浓度梯度的紫花苜蓿多酚纯化液, 摇匀, 用9 mmol· L^-1水杨酸-乙醇溶液定容.放置于37 ℃ 恒温水浴中反应60 min, 测定其在536 nm 处的吸光度, 标记为A_x; 以不加紫花苜蓿多酚纯化液的上述溶液为空白对照, 其在536 nm 处的吸光度标记为A₀.平行测定3次, 取平均值, 依照下式计算· OH自由基的清除率.V_C 清除· OH自由基的对照试验方法同上.

· OH自由基清除率= $\begin{matrix} \frac{A_{0} - A_{x}}{A_{0}} \end{matrix}$ × 100%.

2 结果与分析

2.1 单因素试验

2.1.1 液料比对多酚提取量的影响固定酶量为2%, 酶解时间为60 min, 超声时间为30 min, 超声温度为50 ℃ , pH为4.8, 考察不同液料比对多酚提取效果的影响(图1a).随着液料比的增大, 紫花苜蓿多酚的提取量随之增加, 提取液质量浓度则呈先增加后减少的趋势(图1b), 在液料比为30:1时, 多酚提取量基本达到平衡, 而提取液质量浓度达到最大值.这可能是因为随着液料比的增大, 溶剂所占比例增加, 使得紫花苜蓿粉末与溶剂的接触面积大大增加, 有利于多酚类物质的溶出, 减小传质阻力, 但同时也增加了浓缩成本, 为此本试验选择最佳料液比为30:1.

	Figure Option View Download New Window
	图1 各影响因素对多酚提取量的影响Fig.1 Effects of liquid-solid ratio on polyphenols yield

2.1.2 加酶量对多酚提取率的影响固定液料比为30:1, 酶解时间为60 min, 超声时间为30 min, 超声温度为50 ℃ , pH为4.8, 考察不同酶添加量对多酚提取量的影响(图1c).添加纤维素酶1%~5%(酶与紫花苜蓿粉的质量百分数)比未添加纤维素酶(0)的提取效果明显增加, 随着纤维素酶含量的增加, 提取量随之增加, 到4%时趋于平衡.这是因为在酸性条件下, 纤维素酶能通过催化作用破坏紫花苜蓿的细胞壁, 增加其通透性, 降低多酚溶出的传质阻力, 但是随着纤维素酶含量的增加, 溶液中酶与底物浓度达到饱和状态, 故多酚含量不再增加.因此, 本试验选择纤维素酶的最佳添加量为4%.

2.1.3 酶解时间对多酚提取率的影响固定液料比为30:1, 加酶量4%, 超声时间为30 min, 超声温度为50 ℃ , pH为4.8, 考察添加不同酶解时间对多酚提取量的影响(图1d).紫花苜蓿的提取量随着酶解时间的增加而增加, 当酶解时间达到105 min后达到最大值.这是因为随着反应时间延长, 酶解反应越充分, 多酚含量溶出越完全, 当酶解时间为105 min时, 多酚类物质已基本溶出, 因此, 延长酶促时间并不能提高提取效果, 反而有可能会导致多酚类物质遭到破坏.为此, 本试验选择最佳酶解时间为105 min.

2.1.4 超声时间对多酚提取量的影响固定液料比为30:1, 加酶量4%, 酶解时间为105 min, 超声温度为50 ℃ , pH为4.8, 考察不同超声时间对多酚提取量的影响(图1e).超声波的破壁效应和热效应能使埋藏在细胞内部的多酚类物质彻底溶解出来, 随着时间增长, 细胞通透性增加, 多酚的自溶速率增快, 因此紫花苜蓿多酚提取量逐渐增加.当达到60 min时多酚提取量达到最大值, 而后提取效果急剧减弱, 这可能是因为随着时间的延长细胞内外多酚类物质浓度差减小, 传质阻力增加, 不利于多酚的溶出, 且由于时间过长, 易导致多酚类物质结构被破坏.故本试验选择最佳超声时间为60 min.

2.1.5 超声温度对多酚提取量的影响固定液料比为30:1, 加酶量4%, 酶解时间为105 min, 超声时间为60 min, pH为4.8, 考察不同超声温度对多酚提取量的影响(图1f).在40~50 ℃ 范围内紫花苜蓿多酚的提取量随着超声温度的升高而明显增大, 这是因为随着温度升高, 溶剂和多酚类物质的渗透, 扩散和溶解能力大大增加, 使得多酚类物质提取量明显增大.当超声温度超过50 ℃ 时, 可能由于多酚类物质发生氧化, 品质发生变化而导致检测不出, 因而提取量出现明显下降.为此, 本试验选择最适宜提取的超声温度为50 ℃ .

2.1.6 pH对多酚提取率的影响固定液料比为30∶ 1, 酶量为4%, 酶解时间为105 min, 超声时间为30 min, 超声温度为50 ℃ , 考察不同pH值对多酚提取量的影响(图1g), pH为5.6时, 紫花苜蓿多酚的提取量达到最大值, 这说明pH=5.6为纤维素酶提取紫花苜蓿多酚的最佳pH值.在此pH值时, 纤维素酶能发挥其最大活性, 最大限度地破坏紫花苜蓿的细胞壁, 降低传质阻力, 提高紫花苜蓿多酚的溶出效率.此外, 多酚类物质容易以氢键的方式键合在一起, 在弱酸性条件下有利于破坏氢键促使多酚类物质的彻底释放, 因此, 本研究选择pH为5.6作为最佳试验pH值.

2.2 响应面试验结果

2.2.1 响应面试验结果及方差分析根据Box-Benhnken的中心组合试验设计原理, 选取对紫花苜蓿多酚提取效果影响较大的3个因素:酶量(X₁), 超声时间(X₂)和超声温度(X₃)进行优化试验, 试验因素和水平设计表见表2, 响应面分析方案见表3.

表2 响应曲面试验以及响应值 Table 2 Experiment design and result of response surface method analysis

表3 响应曲面方差分析表 Table 3 Variance analysis of regression equation

方差来源 Source	离差平方和 Sum of squares	自由度 df	均方 Mean square	F	p-Value prob> F	显著度 Significance
拟合模型Model	2.47	9	0.27	27.73	0.000 1	* * *
X₁-X₁	0.20	1	0.20	19.86	0.002 9	* *
X₂-X₂	0.37	1	0.37	37.09	0.000 5	* * *
X₃-X₃	0.46	1	0.46	46.69	0.000 2	* * *
X₁X₂	0.044	1	0.044	4.41	0.073 8
X₁X₃	0.030	1	0.030	3.06	0.123 5
X₂X₃	0.018	1	0.018	1.77	0.225 1
$\begin{matrix} {X_{1}}^{2} \end{matrix}$	4.212× 10^-3	1	4.212× 10^-3	0.43	0.535 0
$\begin{matrix} {X_{2}}^{2} \end{matrix}$	0.69	1	0.69	69.35	< 0.000 1	* * *
$\begin{matrix} {X_{3}}^{2} \end{matrix}$	0.59	1	0.59	60.11	0.000 1	* * *
残差Residual	0.069	7	9.898× 10^-3
失拟度Lack of fit	0.043	3	0.014	2.18	0.232 5
绝对误差Pure error	0.026	4	6.566× 10^-3
总离差Cor total	2.54	16
R²=0.972 7	$\begin{matrix} R_{Adj}^{2} \end{matrix}$ =0.937 6	CV=3.21

注Note:* P< 0.05; * * P< 0.01; * * * P< 0.001.

表3 响应曲面方差分析表 Table 3 Variance analysis of regression equation

采用Design-Expert V8.0.6软件对表2进行回归拟合, 得到的拟合方程为Y=-40.35+0.461 0X₁+0.144 0X₂+1.565X₃+5.225× 10^-³X₁X₂-0.017 42X₁X₃-6.618× 10^-⁴X₂X₃+0.031 63 $\begin{matrix} {X_{1}}^{2} \end{matrix}$ -1.009 $\begin{matrix} {X_{2}}^{2} \end{matrix}$ -0.015 04 $\begin{matrix} {X_{3}}^{2} \end{matrix}$ .该拟合模型的相关系数R²=0.972 7, 调整系数 $\begin{matrix} R_{Adj}^{2} \end{matrix}$ =0.937 6, 二者均大于0.900 0, 变异系数CV=3.21, 说明回归模型拟合良好, 试验误差小, 可以用该模型来拟合紫花苜蓿多酚的提取过程.

由方差分析可知, 一次项X₁, X₂, X₃及二次项 $\begin{matrix} {X_{2}}^{2} \end{matrix}$ , $\begin{matrix} {X_{3}}^{2} \end{matrix}$ 的P值均小于0.05(表3), 表明酶量, 超声时间和超声温度对紫花苜蓿多酚的提取量均有显著影响, 其中超声时间及超声温度都达到了极显著水平(P< 0.001), 各个因素对紫花苜蓿多酚提取量的影响大小顺序为超声温度> 超声时间> 酶量.交互项X₁X₂, X₁X₃, X₂X₃的P值均大于0.05, 表明交互因子对紫花苜蓿多酚的影响并不显著.

2.2.2 最佳工艺条件的优化及验证对所建立的模型进行参数优化, 得到该模型的最佳提取工艺为酶量4.86%, 超声时间74.44 min, 超声温度49.17 ℃ , 在此条件下提取量最大预测值可达3.665 mg· g^-1.为检验该回归模型预测结果的可靠性, 对上述预测的最佳工艺条件进行优化验证.为方便操作, 将此工艺条件修正为酶量4.9%, 超声时间74 min, 超声温度49 ℃ , 进行3次平行试验, 得到的实际提取量为3.642 mg· g^-1, 略低于理论预测值, 相对误差仅为0.63%, 说明该模型较好地预测了理论提取量, 超声联合酶法提取紫花苜蓿多酚的工艺具有实际应用价值.

3 紫花苜蓿多酚的抗氧化性

3.1 样品对DPPH自由基的清除能力

在2.79~25.13 μ g· mL^-1范围内DPPH的清除率与紫花苜蓿多酚的质量浓度呈正相关, 当质量浓度为25.13 μ g· mL^-1时, 紫花苜蓿多酚对DPPH自由基的清除率可达到76.23%(图2).与Vc相比, 紫花苜蓿多酚对DPPH的清除率呈先增加后趋于平稳的趋势, 而Vc则始终保持增加的状态.当质量浓度低于19.54 μ g· mL^-1时紫花苜蓿多酚及Vc对DPPH的清除率基本一致.紫花苜蓿多酚质量浓度(X) 与清除率(Y) 的回归方程为Y=12.70+4.174X-0.060 31X² (R²=0.961 1), 紫花苜蓿多酚清除50%DPPH自由基的半数抑制浓度IC₅₀值为10.78 μ g· mL^-1, Vc的质量浓度(X) 与清除率(Y) 的回归方程为Y=16.53+3.472X-0.024 42X² (R²=0.989 4), Vc的IC₅₀为10.54 μ g· mL^-1, 两者数值相近, 表明紫花苜蓿多酚具有较强清除DPPH自由基的能力.

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	图2 紫花苜蓿多酚纯化液及Vc对DPPH的清除效果Fig.2 Effects of alfalfa polyphenols and Vc on the removal of DPPH

3.2 样品对· OH自由基的清除能力

随着质量浓度的增加, 紫花苜蓿提取液多酚和Vc对· OH自由基的清除率不断增大, 且两者的趋势基本一致(图3).当紫花苜蓿多酚质量浓度为28.54 μ g· mL^-1时, 其对DPPH自由基的清除率达到70.58%.紫花苜蓿多酚清除50%· OH自由基的半数抑制浓度IC₅₀值为19.28 μ g· mL^-1与Vc的IC₅₀值(18.13 μ g· mL^-1)相差不大, 表明紫花苜蓿多酚同样具有较强清除· OH自由基的能力.

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	图3 紫花苜蓿多酚纯化液及Vc对· OH的清除效果Fig.3 Effects of alfalfa polyphenols and Vc on the removal of · OH

4 结论

采用响应面法优化超声协同酶法提取紫花苜蓿多酚的工艺, 同时对提取产物进行了一系列清除DPPH和· OH自由基的体外抗氧化性试验研究.得出提取紫花苜蓿多酚的最佳工艺条件为:酶量4.9%, 超声时间74 min, 超声温度49 ℃ , 多酚提取量可达3.642 mg· g^-1, 与预测值相比相对误差仅为0.63%; 此外, 紫花苜蓿多酚对DPPH和· OH自由基均具有有较好的清除效果, IC₅₀分别为10.78 μ g· mL^-1和19.28 μ g· mL^-1, 表明紫花苜蓿多酚可作为一种天然, 有效的抗氧化剂, 有望广泛应用于医药, 食品及美容等行业.

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献

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[11]	尚红梅, 陈诚, 刘祥, 姚海俊, 刘亚琪. Folin Ciocaileu比色法测定菊苣中多酚的含量. 草业科学, 2013, 30(9): 1445-1448. Shang H M, Chen C, Liu X, Yao H J, Liu Y Q. Determination of polyphenol content in chicory by Folin Ciocalteu colorimetry. Pratacultural Science, 2013, 30(9): 1445-1448. (in Chinese) [本文引用:1]
[12]	何雪梅, 孙健, 李丽, 盛金凤, 赵谋明. 蔗梢多酚类化合物抗氧化与抗肿瘤活性研究. 食品工业科技, 2015, 36(23): 343-347. He X M, Sun J, Li L, Sheng J F, Zhao M M. Antioxidant and antitumor activities of polyphenol compounds from sugarcane top. Science and Technology of Food Industry, 2015, 36(23): 343-347. (in Chinese) [本文引用:1]
[13]	Feng X F, Liu F, Lin X J, Liu N N, Wang X. Purification and characterization of polyphenol oxidase from the bud of Lonicera confusa. Journal of Food Biochemistry, 2014, 38(6): 533-541. [本文引用:1]
[14]	Cai X X, Hong Y X, Wang S Y, Zhao L N, Rao P F. Purification and enzymatic characteristics of a novel polyphenol oxidase from lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn. ). International Journal of Food Science & Technology, 2015, 50(4): 1026-1032. [本文引用:1]
[15]	刘杰, 张凤雪, 阿来·赛坎, 丁文欢, 田树革. 维药苜蓿子中总多酚与总多糖的含量测定. 新疆医科大学学报, 2015, 38(5): 571-573. Liu J, Zhang F X, Alai S K, Ding W H, Tian S G. Determination of total polyphenols and total polysaccharides in Medicago sativa L. Journal of Xinjiang Medical University, 2015, 38(5): 571-573. (in Chinese) [本文引用:1]
[16]	燕雪花, 刘宏炳, 孙芸, 田树革, 雷海民. Folin-Ciocaileu 比色法测定新疆不同产地紫花苜蓿中总多酚含量. 安徽农业科学, 2012, 40(32): 15724-15725. Yan X H, Liu H B, Sun Y, Tian S G, Lei H M. Determination of the content of total polyphenol for Medicago sativa L. of xinjiang by folin-ciocaileu. Journal of Anhui Agricultural Sciences, 2012, 40(32): 15724-15725. (in Chinese) [本文引用:1]
[17]	孟娜, 魏胜华, 陶玉贵, 朱龙宝, 项驷文. 超声波-酶法联合提取绞股蓝总黄酮及其抗氧化活性的研究. 食品工业科技, 2014(3): 138-141. Meng N, Wei S H, Tao Y G, Zhu L B, Xiang S W. Study on the extraction of total flavonoids from Gynostemma pentaphyllum by enzymatic-ultrasonic method and the flavonoids antioxidation activities. Science and Technology of Food Industry, 2014(3): 138-141. (in Chinese) [本文引用:1]
[18]	张翔宇, 谭兴和, 蔡文, 卢卡, 张喻. 超声波协同酶法提取芹菜中总黄酮的工艺优化. 中国酿造, 2015, 34(1): 50-53. Zhang X Y, Tan X H, Cai W, Lu K, Zhang Y. Optimization of total flavonoids extraction technology from celery by ultrasonic-enzyme synergistic method. China Brewing, 2015, 34(1): 50-53. (in Chinese) [本文引用:1]
[19]	包怡红, 王硕, 王文琼, 王振宇. 超声波酶法提取红松树皮中多酚类化合物的研究. 食品工业科技, 2013, 34(3): 232-236. Bao Y H, Wang S, Wang W Q, Wang Z Y. Study on ultrasonic-enzymatic extraction of polyphenolic compounds in Korean pine bark. Science and Technology of Food Industry, 2013, 34(3): 232-236. (in Chinese) [本文引用:1]
[20]	陈玮琦, 郭玉蓉, 张娟, 张晓瑞. 苹果枝条多酚分离纯化及其抗氧化活性研究. 食品工业科技, 2015, 36(4): 231-236. Chen W Q, Guo Y R, Zhang J, Zhang X R. Study on the extraction and purification of polyphenols from apple branch and their antioxidative activities. Science and Technology of Food Industry, 2015, 36(4): 231-236. (in Chinese) [本文引用:1]

2013

0.0

余凡, 葛亚龙, 杨恒拓, 田光辉. 苜蓿的营养价值及其在食品加工中的应用. 包装与食品机械, 2013, 31(6): 51-54.

, Ge Y

, Yang H

, Tian G

The alfalfa nutritional value and its application in food research.

Packaging and Food Machinery, 2013, 31(6): 51-54. (in Chinese)

摘　要：苜蓿中合有碳水化合物、蛋白质、膳食纤维、脂肪、胡罗卜素、维生素E、矿物质等营养成分，具有极高的营养价值。本文介绍了国内外有关苜蓿营养成分研究概况和苜蓿挂面、苜蓿饮料、苜蓿灌肠、苜蓿罐头及苜蓿茶等苜蓿食品的开发现状，旨在为苜蓿食品的开发和综合利用提供生产指导。

... 紫花苜蓿(Medicage stativa)为多年生豆科苜蓿属植物,在我国长江西北,华北,东北,西北地区均有种植,是我国的主产牧草之一,因其强适应性,高产草量,营养均衡且品质极佳等优点而被誉为是"牧草之王"^[1,2,3] ...

2013

0.0

杨红善, 常根柱, 包文生. 紫花苜蓿的航天诱变. 草业科学, 2013, 30(2): 253-258.

Yang H

, Chang G

, Bao W

Preliminary study on the space mutation breeding of alfalfa.

Pratacultural Science, 2013, 30(2): 253-258. (in Chinese)

航天诱变育种是以高科技返回式卫星为平台的新兴育种方法,其目的是利用太空的特殊环境使种子遗传信号发生改变,地面种植后,获得有益突变体,选育新种质、新材料和培育新品种的植物育种技术。航天育种已在小麦(Triticum aestivum)、水稻(Oryza sativa)、辣椒(Capsicumspp.)、番茄(Lycopersicon esculentum)等农作物及蔬菜上被广泛应用,且已通过国家或省级鉴定了72个品种,我国的航天育种走在世界前列,但牧草航天育种尚处于初始阶段, 主要集中于紫花苜蓿(Medicago sativa)方面的相关研究。本文简要阐述紫花苜蓿航天诱变研究的自身特点,以及目前我国紫花苜蓿航天诱变研究进展,并提出当前存在的问题。

2015

0.0

陈立强, 师尚礼. 42份紫花苜蓿种质资源遗传多样性的SSR分析. 草业科学, 2015, 32(3): 372-381.

Chen L

, Shi S

Genetic diversity of 42 alfalfa accessions revealed by SSR markers.

Pratacultural Science, 2015, 32(3): 372-381. (in Chinese)

In order to reveal the genetic diversity of alfalfa germplasm resources, the genetic diversity of one wild and 41 cultivated alfalfa accessions were analyzed using SSR markers. The results showed that there were totally 231 alleles and 163 polymorphic alleles generated from these 42 alfalfa accessions by 15 SSR primers. The mean values of polymorphic percentage, Nei’s gene diversity and shannon’s information index for these 15 primer pairs were 71.55%, 0.210 0 and 0.326 3, respectively. The similarity coefficient of accessions ranged from 0.641 to 0.913 with an average of 0.791, and the mean value of similarity coefficient between wild alfalfa accessions and cultivars was lower than that among cultivars. Cluster analysis classified accessions into five defined groups at the genetic similarity value of 0.778, among which Longdong wild alfalfa, CW 200 and CW 787 were clustered into three independent groups, indicating that these accessions had relatively distant genetic relationship with the others. According to principal component analysis, the accessions can be divided into four groups, and the accessions in the Ⅰ and the Ⅱ groups had relatively distant genetic relationship with those in the Ⅲ and the Ⅳ groups. In conclusion, the alfalfa accessions used in the present study had relatively high genetic diversity, and some of which had relatively independent genetic characteristics.

为了补充现有苜蓿（Medicago sativa）种质资源的遗传多样性信息，采用SSR分子标记技术对1份野生紫花苜蓿种质和41份栽培紫花苜蓿品种的遗传多样性进行了研究。15对引物在供试苜蓿材料中共获得231条扩增带，其中163条具有多态性。引物的多态位点百分率、Nei’s基因多样性指数和Shannon信息指数的平均值分别为71.55%、0.210 0和0.326 3。供试材料间的相似系数介于0.641～0.913，平均为0.791，栽培品种间的平均相似系数相对较大，野生种质资源与栽培品种间的平均相似系数相对较小。聚类分析表明，供试材料在相似系数0.778处可聚为五大类，单独聚为类的陇东野生紫花苜蓿、CW 200和CW 787都表现出了与其他材料间较远的亲缘关系。基于主成分分析图，可把供试材料分为四大类，其中第Ⅰ、Ⅱ类与第Ⅲ、Ⅳ类材料间的亲缘关系较远。综上，供试苜蓿种质资源具有较丰富的遗传多样性，部分种质资源表现出了相对独立的遗传特性。

2012

0.0

李小云, 刘庆, 田光辉. 苜蓿中生物活性成分研究进展. 饮料工业, 2012, 15(12): 8-10.

Li X

, Liu

, Tian G

Progress in research on bioactive components in alfalfa.

The Beverage Industry, 2012, 15(12): 8-10. (in Chinese)

摘　要：苜蓿中含有苜蓿叶蛋白、膳食纤维、多糖、皂苷、三萜、类黄酮、绿原酸、香豆素、生物碱等主要生物活性成分，且含量可观，种类丰富多样。对首蓿中生物活性成分研究状况进行了阐述。

... 研究表明,紫花苜蓿中含有蛋白质,黄酮,多糖,挥发油,香豆素以及多酚等多种活性成分,具有很高的药用价值^{[4,5,6,7,8,9]} ...

2013

0.0

... 研究表明,紫花苜蓿中含有蛋白质,黄酮,多糖,挥发油,香豆素以及多酚等多种活性成分,具有很高的药用价值^{[4,5,6,7,8,9]} ...

2012

0.0

李波, 魏广培. 超声波提取苜蓿总皂苷优化工艺的研究. 食品科技, 2012, 37(4): 187-189.

, Wei G

Extraction process of alfalfa saponins with ultrasound.

Food Science and Technology, 2012, 37(4): 187-189. (in Chinese)

摘　要：用超声波法提取苜蓿皂苷,通过L9（3^4）正交试验,探讨了提取条件对苜蓿总皂苷提取量的影响。结果显示：各试验因素对苜蓿总皂苷类物质提取量的影响依次为超声时间、物料比、超声功率、超声温度;最佳工艺条件为A2B3C2D1,即物料比1：20、超声时间30min、超声功率80W、超声温度20℃。在上述最佳条件下,总皂苷的提取率可达1.975%。

... 研究表明,紫花苜蓿中含有蛋白质,黄酮,多糖,挥发油,香豆素以及多酚等多种活性成分,具有很高的药用价值^{[4,5,6,7,8,9]} ...

0.0

施伟梅, 王妙飞, 罗双慧, 吴龙火. 超声联合酶法提取紫花苜蓿总黄酮及其抗氧化性能研究. 作物杂志, 2015(6): 64-69.

Shi W

, Wang M

, Luo S

, Wu L

Study on the extraction of total flavonoids from alfalfa by ultrasonic-enzyme synergistic method and their antioxidation activities. Crops, 2015(6): 64-69. (in Chinese)

摘　要：采用超声联合酶法提取紫花苜蓿总黄酮,利用响应面法对该提取工艺进行优化,并对其提取物进行体外抗氧化活性研究。结果表明,超声联合酶法提取紫花苜蓿总黄酮的最佳工艺为：液料比40：1,超声时间为55min,超声温度为60℃,在此条件下紫花苜蓿总黄酮的提取率达9.928mg/g,与理论值的相对误差为0.40%,相比于其他传统方法,提取量大大提高;此外,紫花苜蓿总黄酮拥有良好的清除DPPH和·OH自由基的能力,其半数清除浓度（IC_50）分别为14.31μg/mL及28.23μg/mL。

... 研究表明,紫花苜蓿中含有蛋白质,黄酮,多糖,挥发油,香豆素以及多酚等多种活性成分,具有很高的药用价值^{[4,5,6,7,8,9]} ...

2014

0.0

董晓宁, 赵海福, 赵强, 移瑞瑞, 靳正娟. 航天紫花苜蓿中黄酮的提取及抑菌活性. 草业科学, 2014, 31(4): 771-775.

Dong X

, Zhao H

, Zhao

, Yi R

, Jin Z

Study on extraction technology and antibacterial of flavonoids from space breeding alfalfa.

Pratacultural Science, 2014, 31(4): 771-775. (in Chinese)

Flavonoid was extracted from space breeding alfalfa with Soxhlet extraction with orthogonal design and content was determined with spectrophotometer at 510 nm.Two bacteria were selected for in vitro antibacterial activity test.The results show that each factor with various influence with the following order: Ultrasonic extraction time>Liquid to solid ratio>Ethanol concentration.The highest content was 10.04 mg·g -1 .The MIC of Escherichia coli and Staphylococcus aureus were 0.40 and 0.70 mg·mL -1 ,respectively.

用索氏回流法正交提取航天紫花苜蓿( Medicago sativa )中的黄酮(芦丁)，以510 nm最大吸光度进行可见光谱检测，测定芦丁含量，并对两种供试菌进行体外抑菌活性测定。结果表明，通过单因素试验确定的各因素影响能力大小为超声提取时间>料液比>乙醇浓度，芦丁含量最高为10.04 mg·g -1 ;大肠埃希氏杆菌的最小抗菌浓度为0.40 mg·g -1 ，金黄色葡萄球菌的最小抗菌浓度为0.70 mg·g -1 。

... 研究表明,紫花苜蓿中含有蛋白质,黄酮,多糖,挥发油,香豆素以及多酚等多种活性成分,具有很高的药用价值^{[4,5,6,7,8,9]} ...

2015

0.0

潘卫仓. 响应面法优化航天紫花苜蓿中叶蛋白的提取工艺. 中国酿造, 2015, 34(1): 80-84.

Pan W

Optimization of extraction technology of leaf protein from space breeding alfalfa by response surface methodology.

China Brewing, 2015, 34(1): 80-84. (in Chinese)

以航天紫花苜蓿为研究对象,其叶蛋白的提取率为考察指标,在单因素试验的基础上,选取提取液pH值、提取温度、料液比、浸泡时间4个因素进行响应面试验设计,建立了航天紫花苜蓿中叶蛋白响应面提取工艺。研究结果表明:航天紫花苜蓿中叶蛋白的最佳提取工艺条件为料液比1:8(g:m L)、提取液pH值6.1、浸泡时间2.0 h、提取温度25.0℃,此工艺下航天紫花苜蓿中叶蛋白提取率为14.0238%,这为航天紫花苜蓿的开发和利用提供了一定的理论依据。

... 研究表明,紫花苜蓿中含有蛋白质,黄酮,多糖,挥发油,香豆素以及多酚等多种活性成分,具有很高的药用价值^{[4,5,6,7,8,9]} ...

2014

0.0

施伟梅, 陈建福, 王妙飞, 董一霏, 吴龙火. 响应面法优化红花紫荆叶中多酚的超声波辅助提取工艺. 粮油食品科技, 2014, 22(5): 38-43.

Shi W

, Chen J

, Wang M

, Dong Y

, Wu L

Optimization of ultrasonic-assisted extraction of polyphenols from B. blakeana Dunn leaves by response surface methodology. Science and Technology of Cereals,

Oils and Foods, 2014, 22(5): 38-43. (in Chinese)

摘　要：为优化超声波辅助提取红花紫荆叶多酚的提取工艺,在单因素试验的基础上,选择液料比（X1）、乙醇浓度（X2）及pH（X3）为自变量,以红花紫荆叶多酚提取率为响应值,采用中心组合（Box-Behnken）实验方法,进行3因素3水平的试验设计,研究了各自变量及其交互作用对多酚提取率的影响.利用Design-Expert软件,建立了多酚提取率与提取过程各因素的数学回归模型, 确定了最佳工艺条件.结果表明乙醇浓度是对响应值影响最大的因素,修正后的最佳提取条件为液料比37∶1、乙醇浓度74％、pH 6,在此条件下,多酚实际提取率为1.47％,与模型预测值（1.49％）基本一致,说明响应面法对红花紫荆叶多酚的提取条件优化合理可行.

... 多酚类化合物是形成植物固体部分的重要组成物质,具有抗氧化,抗肿瘤,预防高血压,抗血栓,抗菌,抗炎等生物活性及具有皮肤保健,美容等功能^{[10,11,12,13,14]},因而受到国内外学者的广泛关注 ...

2013

0.0

尚红梅, 陈诚, 刘祥, 姚海俊, 刘亚琪. Folin Ciocaileu比色法测定菊苣中多酚的含量. 草业科学, 2013, 30(9): 1445-1448.

Shang H

, Chen

, Liu

, Yao H

, Liu Y

Determination of polyphenol content in chicory by Folin Ciocalteu colorimetry.

Pratacultural Science, 2013, 30(9): 1445-1448. (in Chinese)

A quantitative determination method of polyphenol in chicory was studied by using FolinCiocalteu colorimetry. Using gallic acid as standard and the detection wavelength was 765 nm. The results showed that the standard curve for quantifying polyphenol exhibited a good linearity in the range of 0~5 μg·mL-1 (R2=0.999 7). Furthermore, stability, precision, repetition and recovery rate were assayed with relative standard deviation (RSD) as 0.23%～1.60%. The method is convenient, fast, exact, and reliable to determine the total polyphenol in chicory. According to the fitted linear regression equation, the quantitative determination of chicory organs was made, and polyphenol content of root, stem, leaf, flower and seed were 6.71, 24.00, 32.03, 20.34 and 10.17 mg·g-1, respectively.

本研究采用FolinCiocalteu比色法对菊苣（Cichorium intybus）中的多酚含量进行测定。以没食子酸为对照品，检测波长为765 nm。结果表明，在0～5 μg·mL-1范围内，没食子酸吸光度与其质量浓度呈良好的线性关系（R2=0.999 7）；对稳定性、精密度、重现性、回收率进行了试验，相对标准偏差（RSD）为 0.23%～1.60%。该方法简便、快速、准确，是检测菊苣中多酚的可靠方法。根据拟合的线性回归方程进行菊苣各器官多酚的定量测定，结果表明，菊苣根、茎、叶、花和种子中的多酚含量分别为6.71、24.00、32.03、20.34和10.17 mg·g-1。

2015

0.0

何雪梅, 孙健, 李丽, 盛金凤, 赵谋明. 蔗梢多酚类化合物抗氧化与抗肿瘤活性研究. 食品工业科技, 2015, 36(23): 343-347.

He X

, Sun

, Li

, Sheng J

, Zhao M

Antioxidant and antitumor activities of polyphenol compounds from sugarcane top.

Science and Technology of Food Industry, 2015, 36(23): 343-347. (in Chinese)

研究从蔗梢中分离到的8种多酚类化合物的抗氧化活性和抗肿瘤活性。采用DPPH自由基清除能力、氧自由基吸收能力(ORAC)和ABTS自由基清除能力综合评价多酚化合物的体外抗氧化活性,MTT法评价多酚化合物的体外抗肿瘤活性。实验表明,8种化合物中槲皮素的DPPH自由基清除能力显著(p0.05)高于阳性对照Trolox;咖啡酸抑制CNE2(人鼻咽癌细胞)增殖的活性最强,槲皮素抑制SGC7901(人胃癌细胞株)增殖的活性最强,2-(3,5-二羟苯基)-5-羟基-苯并呋喃和槲皮素能较强地抑制Hela(人宫颈癌细胞株)的增殖。蔗梢中的8种多酚类化合物均具有较强的抗氧化活性和一定的抗肿瘤活性,可作为保健食品和保健品的开发原料。

2014

0.0

2015

0.0

2015

0.0

刘杰, 张凤雪, 阿来·赛坎, 丁文欢, 田树革. 维药苜蓿子中总多酚与总多糖的含量测定. 新疆医科大学学报, 2015, 38(5): 571-573.

Liu

, Zhang F

, Alai S

, Ding W

, Tian S

Determination of total polyphenols and total polysaccharides in Medicago sativa L.

Journal of Xinjiang Medical University, 2015, 38(5): 571-573. (in Chinese)

目的：建立苜蓿子中总多糖与总多酚含量的测定方法。方法以葡萄糖、没食子酸为对照品，以蒽酮-硫酸、福林试剂-碳酸钠溶液体系为显色剂，采用可见分光光度法在检测波长582、760 nm 处测定10批苜蓿子中总多糖与总多酚的含量。结果葡萄糖溶液浓度在0．02～0．12 mg／mL、没食子酸溶液浓度为1～7μg／mL （r ＝0．9995）范围内与吸光度呈良好的线性关系，加样回收率为104．30％、101．46％，RSD 为2．40％、2．90％，总多糖的含量为22．34～53．43 mg／g，总多酚的含量为3．03～4．88 mg／g。结论可见分光光度法简单，准确性、重复性良好，为苜蓿子多糖与多酚的进一步研究奠定了基础。

... 刘杰等^[15]采用Folin-Ciocaileu 比色法对苜蓿种子中总多酚的含量进行了检测,其含量为3 ...

2012

0.0

燕雪花, 刘宏炳, 孙芸, 田树革, 雷海民. Folin-Ciocaileu 比色法测定新疆不同产地紫花苜蓿中总多酚含量. 安徽农业科学, 2012, 40(32): 15724-15725.

Yan X

, Liu H

, Sun

, Tian S

, Lei H

Determination of the content of total polyphenol for Medicago sativa L. of xinjiang by folin-ciocaileu.

Journal of Anhui Agricultural Sciences, 2012, 40(32): 15724-15725. (in Chinese)

... 燕雪花等^[16]采用乙醇回流法对新疆不同地区紫花苜蓿总多酚进行了提取,结果表明,不同产地紫花苜蓿总多酚含量存在显著差异 ...

0.0

孟娜, 魏胜华, 陶玉贵, 朱龙宝, 项驷文. 超声波-酶法联合提取绞股蓝总黄酮及其抗氧化活性的研究. 食品工业科技, 2014(3): 138-141.

Meng

, Wei S

, Tao Y

, Zhu L

, Xiang S

Study on the extraction of total flavonoids from Gynostemma pentaphyllum by enzymatic-ultrasonic method and the flavonoids antioxidation activities. Science and Technology of Food Industry, 2014(3): 138-141. (in Chinese)

本文研究了绞股蓝中总黄酮的高效提取和抗氧化性能。先使用纤维素酶和果胶酶分别处理样品后,再利用超声波进行提取的方法所获得的总黄酮的得率最高,可以达到0.498%。对提取总黄酮的抗氧化性研究表明,绞股蓝总黄酮对于DPPH自由基和羟基自由基清除能力较强,在实验所选浓度范围内,总还原能力随浓度增加而增强。

... 超声协同酶提取方法能最大限度破坏细胞壁,增大其通透作用,有利于细胞内含物渗出,进而大大增加植物有效成分的提取量,且能保持其它物质的原生结构,成为目前植物成分提取的热门方法之一^[17,18,19] ...

2015

0.0

张翔宇, 谭兴和, 蔡文, 卢卡, 张喻. 超声波协同酶法提取芹菜中总黄酮的工艺优化. 中国酿造, 2015, 34(1): 50-53.

Zhang X

, Tan X

, Cai

, Lu

, Zhang

Optimization of total flavonoids extraction technology from celery by ultrasonic-enzyme synergistic method.

China Brewing, 2015, 34(1): 50-53. (in Chinese)

To improve the total flavonoids yield of celery, the total flavonoids were extracted by alcohol with ultrasonic-enzyme synergistic method. The effect of enzymatic pH, enzyme addition, ultrasonic power, solid-liquid ratio, ultrasonic time on flavonoids yield of celery was studied. On the basis of single factor test, the optimum process conditions for flavonoids yield was determined as follows: pH 4.0, enzyme addition 210 U/g, ultrasonic power 200 W, solid-liquid ratio 1∶25 (g∶ml), ultrasonic time 40 min. Under these conditions, the total flavonoid yield was 1.018 4%.

为提高芹菜中总黄酮的得率，采用超声波-纤维素酶协同方法醇提芹菜总黄酮，研究了酶解pH值、加酶量、超声功率、料液比、超声时间对芹菜总黄酮得率的影响。在单因素试验的基础上，通过正交试验优化确定了芹菜中黄酮提取的最佳工艺条件，即酶解pH 值为4.0、加酶量210 U/g、超声功率200 W、料液比为1∶25（g∶mL）、超声时间40 min，在此条件下总黄酮得率为1.018 4%。

2013

0.0

包怡红, 王硕, 王文琼, 王振宇. 超声波酶法提取红松树皮中多酚类化合物的研究. 食品工业科技, 2013, 34(3): 232-236.

Bao Y

, Wang

, Wang W

, Wang Z

Study on ultrasonic-enzymatic extraction of polyphenolic compounds in Korean pine bark.

Science and Technology of Food Industry, 2013, 34(3): 232-236. (in Chinese)

采用超声波酶法对红松树皮中多酚类化合物的提取工艺进行研究,以多酚得率、DPPH·清除率为指标,在单因素实验基础上通过正交实验优化最佳工艺条件.结果表明:超声波酶法的最佳工艺条件是:超声温度60℃,超声时间80min,超声功率250W,酶解温度45℃,酶添加量4.0％,酶解时间70min和 pH4.8此时,多酚提取量达到78.79mg/g,DPPH·清除率为63.68％.采用正交实验法优化红松树皮多酚的超声波酶法提取工艺,具有可行性,且此工艺提取的多酚得率较高及具有良好的抗氧化活性.

2015

0.0

陈玮琦, 郭玉蓉, 张娟, 张晓瑞. 苹果枝条多酚分离纯化及其抗氧化活性研究. 食品工业科技, 2015, 36(4): 231-236.

Chen W

, Guo Y

, Zhang

, Zhang X

Study on the extraction and purification of polyphenols from apple branch and their antioxidative activities.

Science and Technology of Food Industry, 2015, 36(4): 231-236. (in Chinese)

研究了6种大孔树脂对苹果枝条多酚的吸附性能,筛选出分离苹果枝条多酚的最佳树脂为X-5,进一步研究X-5大孔树脂纯化多酚的工艺条件和技术参数。所得最佳纯化工艺为:上样浓度为 1mg/m L,流速为1.0BV/h,pH5.0,以70%乙醇溶液为洗脱剂,洗脱流速为2.0BV/h。在此条件下,所得苹果枝条多酚的纯度为72.36%,提取率为0.82%。对纯化后的苹果枝条多酚抗氧化活性进行研究,结果表明:苹果枝条多酚具有较强的还原能力,对羟基自由基、DPPH自由基具有良好的清除能力。

... 4 紫花苜蓿多酚的抗氧化性试验依据上述最佳工艺条件提取紫花苜蓿多酚,并参照陈玮琦等^[20]纯化苹果(Malus sieversii)枝条多酚的方法,采用AB-8大孔吸附树脂对提取液进一步纯化,再将纯化液稀释成不同质量浓度梯度的溶液备用 ...